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人脱帽酶Dcp1a (human mRNA decapping enzyme 1a)是mRNA降解过程中的重要成员之一,构建其真核表达载体,并对其表达和细胞内定位进行分析,可为进一步研究Dcp1a的功能提供基础.本研究以HeLa cDNA文库为模板,采用PCR方法扩增Dcp1a cDNA全长序列并克隆到pmCherry-N1载体.转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,分别进行Xho Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切及测序鉴定.将重组质粒用VigoFect转染试剂转染HeLa细胞,随后用RT-PCR和Western-blot检测Dcp1a在HeLa细胞中的表达,并采用激光共聚焦显微镜观察Dcp1a的亚细胞定位情况.通过DNA测序分析证实目的基因Dcp1a的序列完全正确,人Dcp1a基因真核表达载体pmCherry-N 1-Dcp1a构建成功,并在HeLa细胞中获得表达;激光共聚焦显微镜观察显示Dcp1a蛋白定位在细胞质中,而且HeLa细胞中过表达Dcp1a在胞质中明显形成了P小体(processing body,P-body).实验结果为进一步探讨该基因的功能及其与P小体的相关性奠定了基础.
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生命科学研究
ISSN： 1007-7847
Year： 2018
Issue： 1
Volume： 22
Page： 19-25,50
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