耐热直接溶血素是副溶血弧菌的主要毒素,耐热直接溶血素的制备对进一步建立副溶血弧菌毒素检测方法有很重要的意义.本项目研究了培养温度和培养时间对耐热直接溶血素1、2、3、4等亚基表达的影响.结果显示,培养温度为28℃时最适合耐热直接溶血素亚基的制备.温度低于28℃或高于28℃时,耐热直接溶血素亚基的表达量都较低.培养时间为8-12h时,耐热直接溶血素亚基的制备量达到最大,增加培养时间后,制备量却有明显下降趋势.另外,还对影响酶切去重组耐热直接溶血素亚基标签效率的影响因素进行了研究,包括酶切温度、酶添加量等.结果显示,从15℃到40℃,随着酶切温度的升高,酶切效率逐渐增大;随着酶添加比例的增加,酶切效率逐渐增大,当酶添加比例为1∶20时,酶切效率达到最大.研究结果表明,培养温度和培养时间对于耐热直接溶血素亚基的制备具有较大的影响;酶切温度和酶添加比例对去标签效率也具有影响.