摘要 ：

An HIV-1 cell-cell fusion system was developed to screen HIV-1 entry inhibitors that block cell-cell fusion. In this system, the pEGFP-Tat plasmid was constructed and cotransfected into effector cells (HEK-293T) with HIV-1 envelope plasmid. TZM-bl cell, a genetically engineered cell line that expresses CD4, CXCR4, CCR5 as well as Tat-inducible β-galactosidase and luciferase reporter gene, was used as target cell. Thus, the co-culture of target cells and effector cells allows the cell fusion via Env and the activity of the fusion inhibitor can be quantified by measuring the reporter protein expression. The experimental parameters were optimized and 11 anti-HIV-1 agents including CCR5 antagonist maraviroc, reverse transcription inhibitor zidovudine (AZT) and integrase inhibitor raltegravir were tested. The result showed that the system exhibited high specificity and sensitivity. Two of eight tested anti-HIV-1 agents were found to block the cell-cell fusion. The system is suitable for efficient screening of HIV-1 cell-cell fusion inhibitors. © 2018, Science Press. All right reserved.

关键词 ：

Cell-cell fusion; Drug screening; Entry inhibition; HIV-1

引用：

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摘要 ：

旨在建立一个细胞-细胞融合系统,高效筛选对HIV-1病毒细胞-细胞间传播有抑制作用的药物。构建了p EGFP-Tat质粒,将p EGFP-Tat质粒和HIV-1包膜质粒共转染HEK-293T细胞,成为表达Tat蛋白和包膜蛋白的效应细胞,然后与表达CD4及辅助受体和β-半乳糖苷酶、荧光素酶双报告基因的靶细胞TZM-bl融合,建立了细胞-细胞融合系统,并进行条件优化,确定了最佳的融合体系。用阳性融合抑制剂maraviroc以及没有融合抑制作用的AZT和raltegravir作用于该体系,证明该系统可以特异性有效筛选具有细胞融合抑制作用的药物。用该系统测试了8个样本,发现两种样品对融合有一定的抑制作...

关键词 ：

HIV-1 细胞-细胞融合 药物筛选 进入抑制剂

引用：

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摘要 ：

利用三维定量构效关系研究抗HIV融合抑制剂和受体(跨膜蛋白gp41)的结构-活性关系.基于具有活性的抑制剂,用易位体比较分子场分析方法(topomer comparative molecular field analysis,Topomer CoMFA)方法建立抑制剂结构与活性之间关系的数学模型,并利用统计分析,评价与分析模型的预测能力,结果表明该模型具有较好的预测能力.研究结果可为未知化合物的活性预测、苗头化合物的结构改造、新化合物实体的设计提供理论指导.

关键词 ：

易位体比较分子场分析方法 融合抑制剂 艾滋病病毒 跨膜蛋白gp41 三维定量构效关系

引用：

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关键词 ：

gp41 HIV-1 融合抑制剂

引用：

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摘要 ：

采用分子对接,分子动力学(MD)模拟和分子力学/泊松-波尔兹曼溶剂可有面积方法与分子力学/广义伯恩溶剂可及面积方法(MM-PBSA/MM-GBSA),预测两种N-取代吡咯衍生物与HIV-1跨膜蛋白gp41疏水口袋的结合模式与作用机理.分子对接采用多种受体构象,并从结果中选取几种可能的结合模式进行MD模拟,然后通过MM-PBSA计算结合能的方法识别最优的结合模式.MM-PBSA计算结果表明,范德华相互作用是结合的主要驱动力,而极性相互作用决定了配体在结合过程中的取向.进一步的结合能分解显示,配体的羧基与gp41残基Arg579的静电相互作用对结合有重要贡献.上述工作为进一步优化N-取代吡咯衍生物...

关键词 ：

分子动力学模拟 HIV-1融合抑制剂 跨膜蛋白gp41 MM-PBSA/MM-GBSA 分子对接

引用：

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摘要 ：

本发明公开了一种HIV-1融合抑制剂体外筛选方法，属生物技术领域。 该方法是用可吸附组氨酸标签的磁珠对带有组氨酸标签的HIV-1 gp41五螺旋 蛋白粗提物于微孔板上进行包被，微孔板设阴性对照3孔，每孔分别加入2μl 二甲亚砜，设阳性对照3孔，包被时不加五螺旋蛋白粗提物，其他孔中每孔 分别加入2μl不同浓度的待测化合物样品，之后所有孔均分别加入98μl报告 基团标记C-螺旋溶液，在15-40℃下孵育10分钟，甩去孔内液体，洗板后用 荧光分析仪检测报告基团信号，计算待测样品的抑制率。本发明方法步骤简 单、快速便捷且成本低廉。

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摘要 ：

HIV-1跨膜蛋白gp41是HIV-1包膜与靶细胞膜的融合过程中的关键蛋白,是理想的HIV-1融合抑制剂靶点.为开展以gr41为靶点的抑制剂筛选,以HIV-1 B亚型病毒基因为模板,通过PCR、酶切、连接等方法构建得到gp41 5-helix与6-helix重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表述,经变性和复性后亲和层析纯化蛋白.经SDS-PAGE鉴定,纯化后蛋白纯度较高.通过非变性凝胶电泳证明gp415-helix与C-多肽衍生物T-20存在相互作用,为下一步药物筛选模型的建立奠定了基础.

关键词 ：

gp41 T-20 纯化 表达 非变性凝胶电泳

引用：

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摘要 ：

HIV能特异地攻击人类免疫细胞—CD4~+-T淋巴细胞,最终导致HIV感染者罹患AIDS。到目前为止,还没有能有效清除HIV的药物和方法。HIV表面的糖蛋白"刺突"由亚基gp120和gp41组成,在HIV与宿主靶细胞融合过程中起着关键的作用。将HIV阻断在宿主靶细胞外能阻止前病毒的形成。以gp120和gp41为靶点的药物研制已成为研究热点,并且以gp41为靶点的第一个肽类融合抑制剂T-20已通过美国FDA批准上市。从临床应用来看,T-20仍表现出许多不足,而新型小分子融合抑制剂则有很多优点,具有广阔的研发前景。本文综述了近几年以gp41为靶点的小分子融合抑制剂的研究概况。

关键词 ：

AIDS 小分子融合抑制剂 HIV gp41

引用：

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摘要 ：

HIV-1跨膜蛋白gp41在HIV-1包膜与靶细胞膜融合过程中发挥关键作用,是理想的HIV-1融合抑制剂靶点。为了开展以gp41为靶点的抑制剂筛选研究,本研究以HIV－1 B亚型病毒基因组为模板,通过PCR、酶切、连接等方法构建得到gp41 5-helix重组质粒,在原核细胞中进行表达研究。重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,变性和复性后亲和层析纯化蛋白,用SDS-PAGE鉴定表达和纯化产物。构建的重组质粒获得高效稳定表达,为下一步药物筛选模型的建立奠定了基础。

关键词 ：

gp41 表达 五螺旋结构 HIV-1 克隆 纯化

引用：

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摘要 ：

美国疾病控制中心于1981年在美国首先发现获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),此后20多年,艾滋病在全世界迅速的蔓延,已有3000多万人死于艾滋病.目前,开发作用于HIV新靶点的药物已成为共识,而阻断病毒进入细胞是抗HIV药物的重要途径[1].

关键词 ：

gp41 HIV 融合抑制剂

引用：

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