建立了高效液相色谱-串联质谱同时测定小麦粉基质中28种真菌毒素的方法.样品经乙腈/水/甲酸(80∶　18∶　2)提取,C18色谱柱分离,采用多反应监测模式进行检测,使用外标法定量.结果　表明,在高、中、低三个加标浓度水平下进行方法学验证,28种真菌毒素回收率范围在60％　～　120％之间、相对标准偏差小于11％,满足国家标准GB/T　27404-2008中的实验室质量控制规范的要求.利用本方法对市售小麦粉样品进行检测,结果显示呕吐毒素及其衍生物、伏马毒素的检出率最高.部分样品中的呕吐毒素含量超出我国限量标准(＜1　000　μg/kg).本方法可实现小麦粉中28种真菌毒素的同时样品前处理及检测,并可应用于真菌毒素风险的高效筛查.