目的　探讨麦冬皂苷D(OP-D)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及机制.方法　通过H2O2诱导建立H9c2细胞氧化损伤模型,细胞分为正常对照组(予以无血清培养基培养28　h)、H2O2损伤模型组(H2O2400μmol·L-1处理3　h)、OP-D　5,10和20μmol·L-1预处理组(OP-D预处理24　h后+H2O2400μmol·L-1处理3　h)、花生四烯酸CYP环氧酶活性抑制剂6-(2-炔丙基羟苯基)己酸(PPOH)干预组(OP-D　20μmol·L-1+PPOH　10μmol·L-1,PPOH于OP-D处理前1　h加入细胞).MTT法测定细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测环氧-二十碳-三烯酸(11,12-DHET和14,15-DHET)含量,ELISA法检测细胞内丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术(FCM)检测活性氧(ROS)水平及细胞凋亡水平、Western印迹法检测细胞色素P4502J3(CYP2J3)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白在细胞中的表达,利用PPOH进一步验证OP-D减轻细胞氧化应激的可能内在机制.结果　H2O2400μmol·L-1明显抑制H9c2细胞存活率(P＜0.01),OP-D可明显增加H2O2损伤后细胞存活率(P＜0.01);不同浓度OP-D增加11,12-DHET和14,15-DHET含量(P＜0.05,P＜0.01);OP-D增加H2O2损伤后细胞NO含量(P＜0.05,P＜0.01)、增强SOD活性(P＜0.05)及降低MDA、LDH含量(P＜0.05,P＜0.01);OP-D显著降低H2O2损伤后细胞氧化应激及凋亡水平(P＜0.05,P＜0.01);OP-D预处理上调H2O2损伤后细胞CYP2J3蛋白和mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01)、激活PI3K/Akt-eNOS通路的磷酸化水平(P＜0.05,P＜0.01);提前给予PPOH后,OP-D保护效应被抑制(P＜0.05,P＜0.01).结论　OP-D能减轻H2O2所致的H9c2细胞损伤,可能是通过诱导CYP2J3表达及增加11,12-DHET和14,15-DHET含量,激活PI3K通路促进其下游因子Akt和eNOS磷酸化发挥作用.