目的　试验测评纳米CuO在体外培养条件下离子化水平及其对细胞毒性贡献率.方法　粒径为40和200　nm的近球型CuO纳米颗粒　(CuO-NPs)　用于测试.以超滤离心滤过液中铜元素的含量代表CuO-NPs的离子化水平.ICP-MS方法　用于铜元素含量测定.细胞毒性试验设CuO-NPs　(40和200　nm粒径)　组、CuSO4组、HPMC组和无处理组.在添加和不添加D-青霉胺　(D-PA)　情况下给A549细胞染毒,　分别于染毒后6和24　h采用刃天青法测算细胞抑制率　(IR)　并计算离解铜离子对细胞毒性贡献率.结果　在CuO-NPs-DMEM/F12体系中,　40和200　nm　CuO-NPs在孵育6　h时滤过液中铜离子测定浓度分别为　(3.6±0.1)　和　(2.8±0.2)　mg/L,　在孵育24　h滤过液中铜离子测定浓度分别为　(3.9±0.1)　和　(1.8±0.1)　mg/L,　上述两个时间点下40　nm　CuO-NPs滤过液中铜离子测定浓度均显著高于200　nm　CuO-NPs　(P＜0.05)　.细胞毒性试验结果　显示,　在添加D-青霉胺情况下,　40和200　nm　CuO-NPs对A549细胞作用6　h的细胞抑制率分别是64.7％和47.2％,　作用24　h的细胞抑制率分别是87.5％和70.9％.在不添加D-青霉胺情况下,　40和200　nm　CuO-NPs对A549细胞作用6　h的细胞抑制率分别是90.3％和69.4％,　作用24　h的细胞抑制率分别是95.2％和86.0％.求得40和200　nm　CuO-NPs对A549细胞作用6　h的离子化毒性贡献率分别为28.3％和32.0％,　作用24　h的离子化毒性贡献率分别为8.1％和17.6％.结论　CuO-NPs在体外培养体系中发生离子化现象,　离子化水平与CuO-NPs粒径和时间有关.离子化对CuO-NPs细胞毒性具有一定贡献.