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利用 TALEN 技术建立恒河猴 TRIM5α基因突变细胞株,为进一步研究 TRIM5α基因的功能奠定基础。构建针对TRIM5α打靶基因的 TALEN,通过点突变的方法获得包含 TRIM5α第7个外显子中打靶位点1211-1224的基因序列并构建点突变donor 载体。将打靶 TRIM5α基因的 TALEN 质粒和 donor 质粒电转入恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中,无限稀释法获得单克隆细胞系,通过抽提基因组 DNA,再利用 PCR 技术扩增目标序列并测序筛选出 TRIM5α碱基缺失(1215-1216)和点突变(1213-1215,1217)的细胞系。通过共转 TALEN 质粒和点突变的 donor 质粒筛选获得了 TRIM5α基因敲除和 TRIM5α基因点突变的 LLC-MK2细胞系。
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