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王小莉 (王小莉.) | 余庆 (余庆.) | 袁雅红 (袁雅红.) | 腾智平 (腾智平.) | 李东升 (李东升.) | 曾毅 (曾毅.)

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摘要:

利用 TALEN 技术建立恒河猴 TRIM5α基因突变细胞株,为进一步研究 TRIM5α基因的功能奠定基础。构建针对TRIM5α打靶基因的 TALEN,通过点突变的方法获得包含 TRIM5α第7个外显子中打靶位点1211-1224的基因序列并构建点突变donor 载体。将打靶 TRIM5α基因的 TALEN 质粒和 donor 质粒电转入恒河猴肾细胞(LLC-MK2)中,无限稀释法获得单克隆细胞系,通过抽提基因组 DNA,再利用 PCR 技术扩增目标序列并测序筛选出 TRIM5α碱基缺失(1215-1216)和点突变(1213-1215,1217)的细胞系。通过共转 TALEN 质粒和点突变的 donor 质粒筛选获得了 TRIM5α基因敲除和 TRIM5α基因点突变的 LLC-MK2细胞系。

关键词:

点突变 TRIM5α 恒河猴 TALEN

作者机构:

  • [ 1 ] [王小莉]北京工业大学生命科学与生物工程学院,北京 100124; 湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所,十堰 442000
  • [ 2 ] [余庆]湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所,十堰,442000
  • [ 3 ] [袁雅红]北京工业大学生命科学与生物工程学院,北京 100124; 湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所,十堰 442000
  • [ 4 ] [腾智平]中国预防医学科学院
  • [ 5 ] [李东升]湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所,十堰,442000
  • [ 6 ] [曾毅]北京工业大学

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来源 :

生物技术通报

ISSN: 1002-5464

年份: 2016

期: 12

卷: 32

页码: 53-57

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