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摘要：
本研究筛选能稳定表达HPV18 E5蛋白的细胞株,并检测HPV18 E5蛋白对细胞增殖及周期的影响.通过PCR方法扩增得到HPV18E5基因,经酶切和连接构建含His标签的pSecTag-HPV18E5真核表达质粒.运用脂质体介导的方法将重组质粒转染Balb/c3T3细胞,并用含有博来霉素的培养基筛选阳性细胞株.利用Westernblot和免疫酶法鉴定HPV18E5在细胞中的表达.运用CCK-8法、流式细胞术检测HPV18E5对细胞增殖及细胞周期的影响.结果显示pSecTag-HPV18E5真核表达质粒构建成功;重组质粒转染Balb/c3T3细胞后,经400μg/mL博来霉素筛选21d,得到稳定表达HPV18 E5蛋白的细胞株;与对照组相比,HPV18 E5稳定表达细胞株的细胞增殖能力明显增强,细胞周期中S期的比值明显增加.研究表明HPV18 E5对细胞增殖及细胞周期有影响.本结果为进一步深入研究HPV18 E5蛋白的生物学特性及致癌作用奠定了基础.
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