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目的 构建人乳头瘤病毒18型E5与EGFP融合基因真核表达载体,鉴定E5基因在BALB/c 3T3细胞中的表达.方法 用PCR方法扩增得到HPV18E5及EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag-HPV 18 E5-EGFP融合基因真核表达载体.通过脂质体介导的方法将重组质粒转染BALB/c 3T3细胞,用RT-PCR方法检测其表达,荧光显微镜下观察目的基因的表达.结果 成功构建pSecTag-HPV18E5-EGFP融合基因真核表达载体,RT-PCR结果显示HPV18E5基因可以在BALB/c3T3细胞中正常转录,荧光显微镜下观察到荧光的存在.结论 pSecTag-HPV 18 E5-EGFP融合基因真核表达载体构建成功,重组质粒可以在BALB/c 3T3细胞内表达,重组质粒的构建为进一步研究E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了基础.
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