目的:建立质粒pVAX1-PENK的大规模制备工艺。方法:对大肠杆菌工程菌DH5α-pVAX1-PENK进行补料发酵,利用自行发明的连续碱裂解过程对菌体进行裂解,经超滤浓缩后,用Sepharose　6　Fast　Flow层析柱分离DNA与RNA,再经Plasmidselect　Xtra层析柱分离超螺旋质粒DNA与开环或线性质粒DNA,最后经Source　15Q层析柱精制质粒DNA。结果:发酵获得质粒pVAX1-PENK的产率为182　mg/L,经碱裂解及层析分离后,最终制备的质粒DNA超螺旋比例大于98%,总回收率为60.5%,纯度(D260nm/D280nm)为1.8~2.0。结论:建立的质...