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刘斌 (刘斌.) | 刘昕 (刘昕.) | 李杉 (李杉.) | 何红秋 (何红秋.) | 张小轶 (张小轶.) | 谭建军 (谭建军.) | 陈慰祖 (陈慰祖.) | 王存新 (王存新.)

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CQVIP PKU CSCD

摘要:

整合酶被认为是抗HIV-1药物研究的理想靶点之一.为了建立便捷高效的整合酶链转移反应抑制剂筛选方法,首先将HIV-1整合酶原核表达载体pNL-IN转化入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)进行原核表达,并用镍琼脂糖凝胶进行亲和纯化,获得了纯度和活性均较高的整合酶重组蛋白;然后设计了生物素标记的供体DNA和FITC标记的靶DNA,用链霉亲和素磁珠捕获反应体系中的DNA产物;最后用荧光分析仪检测DNA产物的荧光信号,并计算待测样品的抑制率.用已知整合酶抑制剂S-1360和MK-0518对筛选方法进行了验证,测定结果与已有实验数据相当,表明本筛选方法能够有效应用于HIV-1整合酶链转移反应抑制剂的筛选.与现有的整合酶链转移反应抑制剂筛选方法相比,本筛选方法步骤更为简化、耗时更短、成本更低.

关键词:

链转移 整合酶 抑制剂筛选 HIV-1

作者机构:

  • [ 1 ] [刘斌]北京工业大学
  • [ 2 ] [刘昕]北京工业大学
  • [ 3 ] [李杉]北京工业大学
  • [ 4 ] [何红秋]重庆市科学院
  • [ 5 ] [张小轶]北京工业大学
  • [ 6 ] [谭建军]北京工业大学
  • [ 7 ] [陈慰祖]北京工业大学
  • [ 8 ] [王存新]北京工业大学

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来源 :

中国生物工程杂志

ISSN: 1671-8135

年份: 2013

期: 1

卷: 33

页码: 67-71

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