目的　人免疫缺陷病毒(human　immunodeficiency　virus,HIV)-1逆转录酶是由p66和p51亚单位组成的异二聚体,抑制其活性可阻断HIV-1的复制,是治疗获得性免疫缺陷综合征(acquired　immunodeficiency　syndrome,AIDS)的重要靶点.获得大量纯化的HIV-1　p66亚单位蛋白有助于研究其活性,为抗HIV-1药物研究提供药物筛选平台.文中构建HIV-1逆转录酶基因的原核表达系统,获取高纯度高活性的HIV-1　p66亚单位重组蛋白.方法　用PCR从含HIV-1　HXB2标准株全基因的质粒中扩增出编码HIV逆转录酶p66亚单位的基因,通过酶切、连接等方法构建重组质粒pET-28a(　+　)-p66,并转化到宿主菌大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl　β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达.表达产物经镍柱亲和层析纯化后获得HIV逆转录酶p66亚单位蛋白.结果　所构建了pET-28a(　+　)-p66质粒酶切片段为1680bp,测序符合HIV逆转录酶p66亚单位编码基因序列.在IPTG诱导下表达相对分子质量为66000的HIV逆转录酶p66亚单位蛋白.结论　成功构建了pET-28a(　+　)-p66质粒,具有较高的HIV逆转录酶p66亚单位蛋白表达效率及活性.