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程绍辉 (程绍辉.) | 马晓慧 (马晓慧.) | 何红秋 (何红秋.) | 刘斌 (刘斌.) | 陈慰祖 (陈慰祖.) | 王存新 (王存新.)

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摘要:

HIV-1整合酶是HIV病毒复制中一个重要的酶,也是治疗艾滋病药物的一个重要靶点.为了开展以整合酶蛋白为靶点的抑制剂筛选,构建HIV-1整合酶重组质粒,在原核细胞中进行可溶性表达和功能研究.通过重叠PCR技术引入F185K和C280S突变于HIV-1 B亚型标准株的整合酶cDNA片段中,PCR扩增片段克隆到pET-28a(+)表达载体中,构建重组质粒,在E coli中进行整合酶基因表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,亲和层析纯化蛋白,酶联免疫吸附实验方法测定整合酶的生物学活性.结果构建的重组质粒获得高效稳定的可溶性表达,ELISA实验证实该蛋白具有整合酶的3''切割DNA和5''链转移的活性.HIV-1整合酶蛋白的可溶性表达和活性研究为建立以整合酶为靶点的抗HIV药物筛选平台打下了基础.

关键词:

ELISA HIV-1 克隆 整合酶 表达

作者机构:

  • [ 1 ] [程绍辉]北京工业大学
  • [ 2 ] [马晓慧]北京工业大学
  • [ 3 ] [何红秋]北京工业大学
  • [ 4 ] [刘斌]北京工业大学
  • [ 5 ] [陈慰祖]北京工业大学
  • [ 6 ] [王存新]北京工业大学

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来源 :

中国生物工程杂志

ISSN: 1671-8135

年份: 2006

期: 1

卷: 26

页码: 22-26

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