本发明涉及一种硫酸酯化多糖及其制备方法和其在体外具有抗艾滋病病毒活性上的应用。该多糖硫含量(重量)为1.01～16.60％，每个单糖单位的硫酸根取代度为0.05～1.78，重均分子量为3.9×103～10.6×104。该多糖可以为硫酸酯化枸杞多糖，硫酸酯化姬松茸多糖，硫酸酯化苦瓜多糖，硫酸酯化云芝多糖和硫酸酯化茶树菇多糖。其制备方法是将多糖溶解或悬浮在10～90倍重量比的溶剂中，加入与多糖残基的摩尔比为1∶2～30的氯磺酸吡啶混合物，于微波合成仪中进行酯化反应，微波功率为20～150W，反应温度为35～100℃，反应时间为3～30min。该方法所用时间短、溶剂用量较小、高温下降解较小。该硫酸酯化多糖在体外具有抗艾滋病病毒活性，具有广阔的应用前景。